APLICABILIDADE DA TÉCNICA DE DISSOCIAÇÃO EM ALTA RESOLUÇÃO NO DIAGNÓSTICO DAS SÍNDROMES DE PRADER-WILLI E ANGELMAN
A análise da curva de Dissociação em Alta resolução (High Resolution Melting - HRM) é um método conveniente para detecção de padrões aberrantes de metilação ao longo do genoma, bem como a genotipagem de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs). Esta abordagem rápida, simples, de tubo fechado e econômica possui alta especificidade e sensibilidade no diagnóstico laboratorial das síndromes de Prader Willi (SPW) e Angelman (SA). Este estudo avaliou a aplicabilidade diagnóstica da técnica de MS-HRM como um método de detecção de SPW e SA. Foram analisados 43 pacientes com suspeita clínica para SPW e SA. O DNA extraído de sangue dos 43 pacientes foi tratado com bissulfito de sódio para posterior análise do padrão de metilação do gene SNURF-SNRPN através das técnicas de MS-PCR com dois pares de primers descritos por Kosaki et al. 1997 e MS-HRM com um único par de primer descrito por Ferreira et al 2019. Ambas as técnicas foram capazes de identificar corretamente 19 pacientes com SPW, 3 pacientes com SA e 21 pacientes controles sem alteração no padrão de metilação. Apesar da concordância diagnóstica em ambas as técnicas, a metodologia de MS-HRM com um único par de primer mostrou-se mais eficiente, rápida, com alta reprodutibilidade e sem a necessidade de metodologias adicionais para um diagnóstico preciso de SPW e SA. A técnica de MS-HRM pode contribuir em estudos que objetivem a elucidação da relação genótipo-fenótipo em SPW assim como se tornar ferramenta diagnóstica e de genotipagem para outras doenças epigenéticas.
APLICABILIDADE DA TÉCNICA DE DISSOCIAÇÃO EM ALTA RESOLUÇÃO NO DIAGNÓSTICO DAS SÍNDROMES DE PRADER-WILLI E ANGELMAN
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DOI: 10.22533/at.ed.6202102072
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Palavras-chave: Síndrome de Prader-Willi, Síndrome de Angelman, MS-HRM
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Keywords: Prader Willi-syndrome, Angelman syndrome, MS-HRM.
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Abstract:
High-Resolution Melting (HRM) analysis is a convenient method for detecting aberrant methylation patterns throughout the genome, as well as genotyping single nucleotide polymorphisms (SNPs). This quick, simple, closed-tube, and cost-effective approach has high specificity and sensitivity in the laboratory diagnosis of Prader Willi (SPW) and Angelman (SA) syndromes. This study assessed the diagnostic applicability of the MS-HRM technique as a method for detecting SPW and SA. 43 patients with clinical suspicion for SPW and SA were analyzed. The DNA extracted from the blood of 43 patients were treated with sodium bisulfite for further analysis of the methylation pattern of the SNURF-SNRPN gene through the techniques of MS-PCR with two pairs of primers described by Kosaki et al. 1997 and MS-HRM with a single pair primer described by Ferreira et al 2019. Both techniques were able to correctly identify 19 patients with PWS, 3 patients with AS and 21 control patients with no alteration in the methylation analysis. Despite the diagnostic agreement in both techniques, the MS-HRM methodology with a single primer pair proved to be more efficient, faster, with high reproducibility, and without the need for additional methodologies for an accurate diagnosis of SPW and SA. The MS-HRM technique can contribute to studies that aims to elucidate the genotype-phenotype relationship in SPW as well as become a diagnostic and genotyping tool for other epigenetic diseases.
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Número de páginas: 15
- Leonardo Henrique Ferreira Gomes
- Letícia da Cunha Guida
- Igor Ribeiro Ferreira
