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capa do ebook 4. PRÍNCIPIOS BÁSICOS EM AMPLIFICAÇÃO DO DNA E GENÔMICA DE CÉLULAS ÚNICAS

4. PRÍNCIPIOS BÁSICOS EM AMPLIFICAÇÃO DO DNA E GENÔMICA DE CÉLULAS ÚNICAS

A compreensão da heterogeneidade celular tem motivado o desenvolvimento tecnológico, resultando em diversos métodos poderosos para analisar o genoma de células únicas. O sequenciamento de célula única consiste em isolar uma única célula, extrair e amplificar seu DNA ou RNA para análises posteriores, envolvendo principalmente sequenciamento de nova geração. Dessa forma, objetivou-se descrever as principais técnicas utilizadas no método single-cell genomics, além de identificar os principais avanços e contribuições da técnica para estudos em biologia molecular. Os principais métodos para isolamento de células únicas incluem: Classificação Celular Ativada por Fluorescência (FACS); Classificação de Células Ativadas Magneticamente (MACS); Microdissecção de Captura a Laser (LCM); Coleta Manual de Células ou Micromanipulação; e Microfluídicos. Além dos métodos de isolamento celular, existem métodos para isolamento direto do núcleo: Isolamento de Núcleos Marcados em Tipo Celular Específico (INTACT) e; Isolamento Descontínuo da Cromatina Específica de Tecido para Imunoprecipitação (BiTS-ChIP). Métodos de amplificação de genoma inteiro foram desenvolvidos para gerar quantidade de DNA suficiente para o posterior seqüenciamento, sendo os três principais: Reação em Cadeia da Polimerase Iniciada por Oligonucleotídeo Degenerado (DOP-PCR); Amplificação de Deslocamento Múltiplo (MDA); e Múltiplos Ciclos de Amplificação Baseados em Anelamento e Loop (MALBAC). Os avanços nas análises de células únicas possibilitaram novas descobertas na biologia molecular, bem como na medicina. O sequenciamento genômico de células únicas ampliará cada vez mais o conhecimento a cerca da complexidade e heterogeneidade celular em organismos normais, bem como no desenvolvimento dos seres vivos e das doenças.

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4. PRÍNCIPIOS BÁSICOS EM AMPLIFICAÇÃO DO DNA E GENÔMICA DE CÉLULAS ÚNICAS

  • DOI: 10.22533/at.ed.7532104064

  • Palavras-chave: Biologia Molecular; Biotecnologia; Genômica.

  • Keywords: Molecular biology; Biotechnology; Genomics.

  • Abstract:

    The understanding of cellular heterogeneity has motivated technological development, resulting in several powerful methods to analyze the genome of single cells. Single-cell genome sequencing consists of isolating a single cell, extracting and amplifying its DNA or RNA for further analysis, mainly involving new generation sequencing. Thus, the objective was to describe the main techniques used in the single-cell genomics method, in addition to identifying the main advances and contributions of the technique to studies in molecular biology. The main methods for isolating single cells include: Fluorescence-activated cell sorting (FACS); Magnetic activated cell sorting (MACS); Laser capture microdissection (LCM); Manual cell collection or Micromanipulation; e Microfluids. In addition to cell isolation methods, there are methods for direct isolation of the nucleus: Isolation of nuclei in tagged cell types (INTACT); Isolation of tissue-specific chromatin for immunoprecipitation (BiTS-ChIP). Methods of whole genome amplification were developed to generate enough DNA for subsequent sequencing, the main three being: Degenerate oligonucleotide primed-polymerase chain reaction (DOP-PCR); Multiple Displacement Amplification (MDA); e Multiple annealing and looping based amplification cycles (MALBAC). The advances of single-cell analysis enabled new discoveries in molecular biology as well as in medicine. Genomic sequencing of single cells will increasingly expand knowledge about the complexity and cellular heterogeneity in normal organisms, as well as in the development of living beings and diseases.

  • Número de páginas: 15

  • Anderson Barros Archanjo
  • Bárbara Risse Quaioto
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