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capa do ebook 7. EXPRESSÃO HETERÓLOGA DE PROTEÍNAS

7. EXPRESSÃO HETERÓLOGA DE PROTEÍNAS

Proteínas são macromoléculas importantes para o funcionamento dos organismos pois desempenham inúmeros papéis centrais, além de serem amplamente utilizadas como reagentes na pesquisa, sendo aplicadas em diversas áreas como indústria farmacêutica, agricultura e diagnóstico de doenças. A expressão heteróloga de proteínas, possível através da tecnologia do DNA recombinante, se destaca por permitir que organismos que não expressam a proteína normalmente possam sintetizá-la em escalas necessárias ao uso que se propõem. Para tal, são necessários vetores de expressão com características adequadas e que possam direcionar corretamente a transcrição e tradução do gene de interesse na célula hospedeira selecionada. Diferentes sistemas de expressão heteróloga de proteínas são conhecidos, podendo-se destacar as bactérias, especialmente Escherichia coli, leveduras, fungos filamentosos, microalgas, cultura de células de mamíferos, insetos e plantas. Cada sistema possui vantagens e desvantagens, sendo o melhor escolhido de acordo com a característica da proteína que se deseja expressar. Quanto à análise e identificação, diversas técnicas são aplicadas para verificar a presença do gene e das proteínas nas células. A purificação das proteínas expressas pelos sistemas ocorre especialmente por cromatografia, podendo ser do tipo cromatografia de troca iônica, de afinidade, de gel filtração, de fase reversa, de imunoafinidade e cromatografia líquida de alta resolução. Sequências específicas de aminoácidos, conhecidas como ‘tags’, geralmente são adicionadas às proteínas para facilitar principalmente o processo de purificação, apesar de influenciar também em outras etapas do processo. Após a obtenção da proteína purificada segue-se com o processamento de acordo com o objetivo proposto com sua síntese.

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7. EXPRESSÃO HETERÓLOGA DE PROTEÍNAS

  • DOI: 10.22533/at.ed.7532104067

  • Palavras-chave: Expressão heteróloga, proteína, DNA recombinante, vetores, purificação de proteína

  • Keywords: Heterologous expression, protein, recombinant DNA, vectors, protein purification

  • Abstract:

    Proteins are important macromolecules for the functioning of organisms because they play countless central roles, besides being widely used as reagents in research, being applied in several areas such as pharmaceutical industry, agriculture and disease diagnosis. The heterologous expression of proteins, possible through recombinant DNA technology, stands out by allowing organisms that do not normally express the protein to synthesize it in scales necessary for its proposed use. For this, expression vectors with adequate characteristics and that can correctly direct the transcription and translation of the gene of interest in the selected host cell are needed. Different systems of heterologous expression of proteins are known, especially bacteria Escherichia coli, yeast, filamentous fungi, microalgae, mammalian cell culture, insects and plants. Each system has advantages and disadvantages, and the best one is chosen according to the characteristic of the protein to be expressed. As for the analysis and identification, several techniques are applied to verify the presence of the gene and proteins in the cells. The purification of the proteins expressed by the systems occurs especially by chromatography, and may be of the ion exchange, affinity, gel filtration, reverse phase, immunoaffinity, and high performance liquid chromatography types. Specific amino acid sequences, known as 'tags', are usually added to proteins to facilitate mainly the purification process, although they also influence other steps in the process. Once the purified protein is obtained, it is processed according to the proposed objective of its synthesis.

  • Número de páginas: 21

  • Greiciane Gaburro Paneto
  • Karolinni Bianchi Britto
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