5. RT-qPCR: ESTUDOS DE EXPRESSÃO GÊNICA
O entendimento sobre o transcriptoma trouxe novas perspectivas sobre a biologia da célula, no qual o estudo do RNA mensageiro (RNAm) e da expressão gênica poderiam auxiliar no entendimento sobre as respostas obtidas à medicamentos, tratamentos, e comportamentos biológicos associados. O PCR de transcrição reversa quantitativa (RT-qPCR) é resultado da evolução da técnica amplamente empregada na biologia molecular de reação em cadeia da polimerase (PCR) e as plataformas de quantificação. A técnica baseia-se na formação de uma fita de DNA complementar (cDNA) a partir de RNA (RNAm), uma enzima transcriptase reversa e a extensão de um ou mais oligonucleotídeo. Para além da pesquisa a ser aplicada, o RT-qPCR ganhou um conjunto de estratégias metodológicas que podem variar nos métodos de detecção, na escolha sobre os iniciadores da transcrição reversa, nas etapas de execução e outras. Este capítulo reúne os processos de evolução da técnica e apresenta algumas das estratégias amplamente empregadas na RT-qPCR.
5. RT-qPCR: ESTUDOS DE EXPRESSÃO GÊNICA
-
DOI: 10.22533/at.ed.7532104065
-
Palavras-chave: RT-qPCR; Expressão Gênica; Biologia Molecular
-
Keywords: RT-qPCR; Gene expression; Molecular biology
-
Abstract:
The understanding of the transcriptome brought new perspectives on the cell's biology. Thus, the study of messenger RNA (mRNA) and gene expression could assist in understanding the responses obtained to drugs, treatments, and associated biological behaviors. The quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR) is the result of the evolution of the technique widely used in molecular biology of polymerase chain reaction (PCR) and the quantification platforms. The technique is based on the formation of a complementary DNA strand (cDNA) from RNA (mRNA), a reverse transcriptase enzyme and the extension of one or more oligonucleotides. The RT-qPCR gained a set of methodological strategies that can vary in the detection methods, in the choice of the initiators of reverse transcription, in the stages of execution, and others. This study brings together the processes of evolution of the technique and presents some of the strategies widely used in RT-qPCR.
-
Número de páginas: 16
- Mayara Mota de Oliveira
- Anderson Barros Archanjo
