PARTIÇÃO DE PROTEASES FIBRINOLÍTICAS PRODUZIDAS POR Aspergillus tamarii kita UCP 1279 ATRAVÉS DO SISTEMA DE DUAS FASES AQUOSAS PEG-FOSFATO
A fibrina é uma proteína estrutural responsável pela formação de coágulos sanguíneos. Entretanto uma desregulação nesse processo pode provocar acúmulo de coágulos na corrente sanguínea, desencadeando doenças graves como embolia pulmonar, trombose e acidente vascular cerebral. Proteases com atividade fibrinolítica atuam na dissolução desses coágulos sanguíneos a partir da “quebra”, por hidrólise, da molécula de fibrina. Devido a esse potencial das enzimas fibrinolíticas, essas se tornaram alvos de diversas pesquisas de aplicação. As enzimas de origem microbianas se tornam muito interessantes, já que proporcionam fácil manuseio, produtividade alta e baixo custo de produção. No bioprocesso para a produção dessas enzimas os sistemas de duas fases aquosas (SDFA) constituem-se em uma técnica que pode, com uma única etapa, clarificar, extrair, pré-purificar e concentrar a amostra. O SDFA frequentemente é composto por polímeros e sais, que quando suas concentrações estão acima da curva de equilíbrio resulta na formação de duas fases imiscíveis, as quais podem ser utilizadas para separar os contaminantes do composto de interesse. O objetivo desse trabalho foi particionar proteases fibrinolíticas produzidas por Aspergillus tamarii Kita UCP1279 através do sistema de duas fases aquosas PEG-Fosfato. O extrato bruto obtido com o processo de fermentação em estado sólido apresentou atividade fibrinolítica de 25,49 U/mL, esse extrato bruto foi a adicionado ao um SDFA composto por PEG e Fosfato em diferentes concentrações, de acordo com um planejamento fatorial 24. As melhores condições de pré-purificação da enzima foram as obtidas com 12,5% de PEG 8000, 15% de Fosfato e pH 8.0, onde obteve-se um coeficiente de partição (K) de 0,06, rendimento (Y) na fase sal de 487,2% e fator de purificação (FP) de 14,1. A pré-purificação da enzima fibrinolítica do Aspergillus tamarii Kita UCP1279 por SDFA PEG-Fosfato apresentou um bom fator de purificação, demonstrando a eficiência do método de purificação escolhido.
PARTIÇÃO DE PROTEASES FIBRINOLÍTICAS PRODUZIDAS POR Aspergillus tamarii kita UCP 1279 ATRAVÉS DO SISTEMA DE DUAS FASES AQUOSAS PEG-FOSFATO
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DOI: 10.22533/at.ed.74720171112
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Palavras-chave: Enzima fibrinolítica; Sistema bifásico; Aspergillus tamarii; Fermentação; Extração
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Keywords: Fibrinolytic enzyme; Two-phase system; Aspergillus tamarii; Fermentation; Extraction
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Abstract:
Fibrin is a structural protein responsible for the formation of blood clots. However, a deregulation in this process can cause clots to accumulate in the bloodstream, triggering serious diseases such as pulmonary embolism, thrombosis and stroke. Proteases with fibrinolytic activity act in the dissolution of these blood clots by "breaking", by hydrolysis, the fibrin molecule. Due to this potential of fibrinolytic enzymes, they become targets for several application researches. The enzymes of microbial origin become very interesting, since they provide easy handling, high productivity and low production cost. In the bioprocess for the production of these enzymes, the aqueous two-phase systems (ATPS) are previously used in a technique that can, with a single step, clarify, extract, pre-purify and concentrate a sample. ATPS is often composed of polymers and salts, which when their concentrations are above the equilibrium curve results in the formation of two immiscible phases, as ATPS can be used to separate contaminants from the compound of interest. The objective of this study was to partition fibrinolytic proteases produced by Aspergillus tamarii Kita UCP1279 through the two-phase aqueous PEG-Phosphate system. The crude extract obtained by the solid state fermentation process presented fibrinolytic activity of 25.49 U/mL, this crude extract was added to an ATPS composed of PEG and Phosphate in different specifications, according to a factorial design 24. The best enzyme pre-purification conditions were obtained with 12.5% PEG 8000, 15% phosphate and pH 8.0, where a partition coefficient (K) was 0.06, the yield (Y) in the salt phase was 487.2% and the purification factor (PF) was 14.1. The pre-purification of the fibrinolytic enzyme of Aspergillus tamarii Kita UCP1279 by ATPS PEG-Phosphate presented a good purification factor, demonstrating an efficiency of the chosen purification method.
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Número de páginas: 15
- Maria Clara do Nascimento
- Julyanne Victória dos Santos Ferreira
- Márcia Nieves Carneiro da Cunha
- Juanize Matias da Silva Batista
- Thiago Pajeú Nascimento
- Romero Marcos Pedrosa Brandão Costa
- Ana Lucia Figueiredo Porto
- Ana Cristina Lima Leite
- VIVIANE DO NASCIMENTO E SILVA ALENCAR
