Visualizações

7

Crescimento de Cryptococcus gattii em meio de cultura feito a partir de serrapilheira do solo da floresta Amazônica

  As leveduras do complexo Cryptococcus neoformans/Cryptococcus gattii possuem distribuição global apresentando oito genótipos principais. A infecção por esse complexo é grave causando 180.000 mortes anualmentete e sequelas irreversíveis. No Amazonas, estudos revelam isolamentos ambientais de C. neoformans (VNI) a partir de excretas de aves e de C. gattii (VGII) associado a material em decomposição, poeira domiciliar, água e solo. Devido essa associação do C. gattii com o solo e material em decomposição, nosso trabalho almeja produzir um meio de cultura utilizando a serrapilheira (camada de folhas e galhos) do solo amazônico. A serrapilheira foi coletada da superfície do solo de uma área de floresta localizada no Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia. Em seguida o material foi esterilizado a 120 °C por 15 minutos e colocada para secar a 150 °C por duas horas,  triturado e peneirado. Foram feitos dois tipos de meio de cultura. O primeiro com 100 g de serrapilheira, 20 g de ágar, 250 mg de antibiótico para 1000 mL de água destilada. O segundo com a mesma constituição, mas suplementado com 20 g de glicose e foi feito o controle com apenas Agar e água destilada. Foi inoculado nos respectivos meios de cultura em duplicata 0,1 mL da suspensão fúngica dos quatro genótipos de cepas de referência, WM 179 (VGI), WM 178 (VGII), WM 161 (VGIII), WM 779 (VGIV), foi para crescer em estufa a temperatura de 25 °C. O crescimento foi observado a cada 24 horas por sete dias. Não houve crescimento de leveduras  no controle (agar e água), mas em ambos os meios de cultura houve crescimento de C. gattii.  No meio com serrapilheira as colônias tiverem crescimento menor e apresentaram cor marrom brilhante. No entanto, no meio contendo serrapilheira suplementado com glicose as colônias cresceram com diâmetro maior, coloração marrom e com textura creme brilhante. Mediante esses resultados observamos que a composição do meio de cultura pode alterar a morfologia das células fúngicas. O meio de cultura utilizando a serrapilheira suplementado com glicose tem potencial para o cultivo de Cryptococcus, pois a serrapilheira fornece N, K, Ca e compostos fenólicos e a glicose as cadeias carbônicas essenciais para a produção das biomoléculas. Além disso, esse meio oferece menor custo, fácil produção e pode ser utilizado para crescimento tanto leveduras quanto fungos filamentosos.   

Crescimento de Cryptococcus gattii em meio de cultura feito a partir de serrapilheira do solo da floresta Amazônica

DOI: 10.22533/at.ed.6192002079

Palavras chave: Amazônia, Criptococose, Meio de cultura

Keywords: Amazon, Cryptococcosis, Culture medium

Abstract:

The yeasts of the Cryptococcus neoformans / Cryptococcus gattii complex have a global distribution with eight main genotypes. Infection with this complex is serious, causing 180,000 deaths annually and irreversible sequelae. In Amazonas, studies reveal environmental isolations of C. neoformans (VNI) from bird excreta and C. gattii (VGII) associated with decomposing material, household dust, water and soil. Due to this association of C. gattii with the decomposing soil and material, our work aims to produce a culture medium using the litter (layer of leaves and branches) of the Amazonian soil. The litter was collected from the soil surface of a forest area located at the National Institute of Amazonian Research. Then, the material was sterilized at 120 ° C for 15 minutes and placed to dry at 150 ° C for two hours, crushed and sieved. Two types of culture medium were made. The first with 100 g of litter, 20 g of agar, 250 mg of antibiotic to 1000 mL of distilled water. The second with the same constitution, but supplemented with 20 g of glucose and the control was made with only agar and distilled water. In duplicate, 0.1 mL of the fungal suspension of the four genotypes of reference strains, WM 179 (VGI), WM 178 (VGII), WM 161 (VGIII) and WM 779 (VGIV), were inoculated in the respective culture media and grown in an oven at 25 ° C. Growth was observed every 24 hours for seven days. There was no growth of yeasts in the control (agar and water), but in both culture mediums there was growth of C. gattii. In the medium with litter, the colonies had less growth and showed a bright brown color. However, in the medium containing litter supplemented with glucose, the colonies grew with a larger diameter, brown color and with a bright cream texture. Through these results, we observed that the composition of the culture medium can alter the morphology of fungal cells. The culture medium using the litter supplemented with glucose has potential for the cultivation of Cryptococcus, since the litter provides N, K, Ca and phenolic compounds and glucose is the essential carbon chains for the production of biomolecules. In addition, this medium offers lower cost, easy production and can be used for growth of both yeasts and filamentous fungi.

Autores

  • Edinaira Sulany Oliveira de Sousa
  • João Vicente Braga de Souza
  • Silviane Bezerra Pinheiro