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capa do ebook OTIMIZAÇÃO DO MÉTODO DE ELLMAN PARA A DETERMINAÇÃO DA ACETILCOLINESTERASE EM ERITRÓCITOS

OTIMIZAÇÃO DO MÉTODO DE ELLMAN PARA A DETERMINAÇÃO DA ACETILCOLINESTERASE EM ERITRÓCITOS

Alguns agrotóxicos como os

carbamatos e organofosforados podem levar

a quadros graves de intoxicação devido a

inibição das colinesterases, sendo que uma

das formas de auxiliar no diagnóstico é a

determinação da atividade destas enzimas

no sangue. Porém, algumas condições

metodológicas são importantes para o ideal

desempenho das enzimas. Assim, o objetivo

deste trabalho foi avaliar possíveis condições

que otimizem a metodologia proposta por

Ellman e colaboradores a fim de alcançar

uma melhor reprodutibilidade. O método foi

adaptado para a determinação da atividade

da acetilcolinesterase em eritrócitos. Foram

testadas algumas possibilidades de interferência

nos resultados, como o comprimento de onda

espectrofotométrico, temperatura, tempo de

incubação, diluição e agitação da amostra.

A atividade enzimática da acetilcolinesterase

mostrou-se variável, conforme as mudanças

ocorridas, após diferentes condições

estabelecidas para a reação. Foi possível

perceber que as amostras sob agitação e

aquelas submetidas a incubação, apresentaram

resultados mais homogêneos, diminuindo o

erro padrão. A temperatura e o comprimento

de onda também apresentaram considerável

influência na atividade enzimática. As amostras

completamente misturadas em seu meio de

reação durante o preparo, expressaram menor

dispersão entre os resultados das triplicatas.

Desta forma, sugerimos uma agitação vigorosa

da solução antes das leituras das absorbâncias

para obtenção de melhores resultados, além

da temperatura controlada em 37ºC durante as

leituras em espectrofotômetro a 405nm.

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OTIMIZAÇÃO DO MÉTODO DE ELLMAN PARA A DETERMINAÇÃO DA ACETILCOLINESTERASE EM ERITRÓCITOS

  • DOI: Atena

  • Palavras-chave: atividade enzimática, colinesterase, interferentes.

  • Keywords: enzymatic activity, cholinesterase, interference.

  • Abstract:

    Some pesticides such as

    carbamates and organophosphates cause

    serious poisonings because of the inhibition of

    cholinesterases. One way to diagnosis those

    cases is through the determination of enzyme

    activity in the blood. However, some conditions

    are important for the best performance of the enzymes. Thus, this work aimed to

    evaluate possible conditions to improve the methodology proposed by Ellman and

    collaborators in 1961. The method was adapted for the determination of erythrocyte

    acetylcholinesterase activity. Some possibilities of interfering in the results were tested,

    such as spectrophotometer wavelength, temperature, incubation time, dilution of

    sample and shaking. The enzymatic activity of erythrocyte acetylcholinesterase was

    shown to be variable as the changes occurred after different conditions established for

    the reaction. The samples under agitation and those submitted to incubation showed

    results more homogeneous, reducing the standard error. Temperature and wavelength

    also had considerable influence on erythrocyte acetylcholinesterase activity. The

    samples that were best mixed with the buffer during the preparation expressed less

    dispersion among the results of the triplicates. Thus, we suggest a vigorous solution

    shaking before readings the absorbance for better results, in addition is necessary to

    control temperature at 37ºC during spectrophotometer readings at 405nm.

  • Número de páginas: 15

  • Fabiana Sari Ferreira
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